熒光定量基因擴(kuò)增儀原理：以探針?lè)晒舛縋CR為例：PCR擴(kuò)增時(shí)在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，該探針兩端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。開(kāi)始時(shí)，探針完整地結(jié)合在DNA任意一條單鏈上，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收，檢測(cè)不到熒光信號(hào)；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測(cè)系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。
 

　　傳統(tǒng)的PCR進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，擴(kuò)增反應(yīng)后需要進(jìn)行染色處理及電泳分離，并且只能作定性分析，不能準(zhǔn)確定量，易造成污染出現(xiàn)假陽(yáng)性，使其應(yīng)用受到限制。實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了對(duì)模板的定量，且具有靈敏度高、特異性和可靠性更好、自動(dòng)化程度高和無(wú)污染的特點(diǎn)，使得熒光定量PCR逐漸取代常規(guī)PCR。
 

　　在PCR擴(kuò)增反應(yīng)的數(shù)個(gè)循環(huán)里，熒光信號(hào)變化不大，接近一條直線(xiàn)，這樣的直線(xiàn)即是基線(xiàn)，這條線(xiàn)是可以自動(dòng)生成也可以手動(dòng)設(shè)置的。之后反應(yīng)會(huì)進(jìn)入指數(shù)增長(zhǎng)期，這個(gè)期間擴(kuò)增曲線(xiàn)具有高度重復(fù)性，在該期間，可設(shè)定一條熒光閾值線(xiàn)，它可以設(shè)定在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段任意位置上，但一般會(huì)將熒光閾值的缺省設(shè)置是3-15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍。每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)到達(dá)設(shè)定的閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)被稱(chēng)為CT值，這個(gè)值與起始濃度的對(duì)數(shù)成線(xiàn)性關(guān)系，且該值具有重現(xiàn)性。
 

　　熒光定量基因擴(kuò)增儀主要用于用于科研及臨床的基因擴(kuò)增、定性PCR基因擴(kuò)增、熒光/酶免終點(diǎn)定量DNA基因擴(kuò)增、基因芯片等其他基因分析應(yīng)用的基因擴(kuò)增等。基因擴(kuò)增儀適合國(guó)內(nèi)外各種PCR試劑盒傳染病類(lèi)、腫瘤類(lèi)、科研類(lèi)。進(jìn)口基因擴(kuò)增儀主要由外殼、變溫反應(yīng)腔、散熱系統(tǒng)、加熱系統(tǒng)、制冷系統(tǒng)、電子控制系統(tǒng)、供電系統(tǒng)、人機(jī)界面等各部分組成。基因擴(kuò)增儀廣泛應(yīng)用于各級(jí)各類(lèi)醫(yī)療機(jī)構(gòu)、大學(xué)及研究所、CDC、檢驗(yàn)檢疫局、獸醫(yī)站、食品企業(yè)及乳品廠(chǎng)等。